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大腸桿菌顯色培養(yǎng)基較傳統(tǒng)使用的SMAC培養(yǎng)方法,特異性和靈敏度更高,用于從臨床和非臨床樣品中選擇性分離產(chǎn)志賀毒素的大腸桿菌,如臨床樣本(糞便)、食品和乳品樣本等。
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基中的蛋白胨和酵母提取物提供氮源和碳源化合物、長(zhǎng)鏈氨基酸、維生素和其他必需營(yíng)養(yǎng)素;緩沖鹽提供緩沖作用;選擇性添加劑抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和其他污染菌群的生長(zhǎng)?;旌巷@色劑使產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌菌落呈紫紅色至紫色。產(chǎn)志賀毒素的大腸桿菌O157通常不發(fā)出熒光,而產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌非O157血清型是發(fā)熒光的(少數(shù)可能不發(fā)光)。其他腸桿菌科菌落顯示為無(wú)色或藍(lán)色或被抑制。由于產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌血清型復(fù)雜,且可能存在抗生素作用產(chǎn)生的變異型,大腸桿菌顯色培養(yǎng)基對(duì)于產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌還需要進(jìn)行生化和血清學(xué)檢驗(yàn)以確認(rèn)鑒定結(jié)果。
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)原理:
蛋白胨提供碳源和氮源;膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng);氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;混合碳水化合物為可發(fā)酵的糖類(lèi);中性紅是pH指示劑,細(xì)菌發(fā)酵糖產(chǎn)酸時(shí)菌落呈桃紅色;亞碲酸鉀抑制非大腸桿菌O157:H7菌的生長(zhǎng);混合色素與大腸桿菌O157:H7所具有的酶發(fā)生特異性反應(yīng),水解底物,釋放出顯色基團(tuán),在淺紅色平板上產(chǎn)生藍(lán)綠色的菌落。
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基的用法:
稱(chēng)取本品 50.1g 加入1000ml蒸餾水,加熱溶解并不停攪拌,煮沸不要超過(guò)1分鐘。分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鐘。取1ml制備好的樣品液加入直徑為9cm無(wú)菌平皿中心,傾入冷卻至45-50℃培養(yǎng)基約15ml,混勻,凝固后,36±1℃倒置培養(yǎng)18~24h?;蚶鋮s至45-50℃時(shí),傾入無(wú)菌平皿,瓊脂*凝固后,在37℃的培養(yǎng)箱中倒置放置1-2小時(shí),加入適當(dāng)稀釋度的樣品液1ml,涂布于大腸桿菌顯色培養(yǎng)基上,36±1℃培養(yǎng)18~24h。