產(chǎn)氣莢膜梭菌的5種保藏方法
產(chǎn)氣莢膜梭菌為厭氧芽孢菌,是引起食源性胃腸炎常見的病原之一。能產(chǎn)生10余種外毒素,有些外毒素即為胞外酶。4種主要毒素中,α毒素(卵磷脂酶)毒性較強(qiáng),各菌型均能產(chǎn)生,在氣性壞疽的形成中起主要作用。此外,很多A型菌株還能產(chǎn)生腸毒素,引起食物中毒。易于形成芽孢,芽孢的熱抵抗力很強(qiáng),由患者糞便中分離的芽抱能耐受100℃1-5h的加熱。除了具有形成芽抱及耐熱等特點(diǎn)之外,生化性狀、毒素及酶的特異性等與其他魏氏梭菌是一致的。
這種毒素對(duì)人致病的主要為A型,A型很容易從外環(huán)境中分離到,屬人和動(dòng)物腸道正常菌群;B-E群在土壤中不能存活,主要寄生于有免疫力的動(dòng)物腸道內(nèi)。食品中污染該菌到一定數(shù)量(1.0×107或更多時(shí))往往在攝食后才能在腸道中生產(chǎn)毒素引起食物中毒。潛伏期約10h,臨床表現(xiàn)為腹痛、腹脹、水樣腹瀉;無(wú)熱、無(wú)惡心嘔吐。產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛分布存在于土壤、人和動(dòng)物腸道中,經(jīng)常在人和許多家養(yǎng)及野生動(dòng)物的腸道中發(fā)現(xiàn)該細(xì)菌的芽孢。牛肉、豬肉、羔羊、雞、火雞、炯肉、紅燒蔬菜、燉肉和肉汁中常常能夠分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌。因此,引起食物中毒的食品大多是畜禽肉類和魚類食物以及加熱不*的牛乳。此外,不少熟食品,由于加溫不夠或中途污染而在緩慢的冷卻過(guò)程中,菌體大量繁殖并形成芽抱產(chǎn)生腸毒素,其食品并不一定在色香味上發(fā)生明顯的變化,但是人們誤食了這樣的熟肉或湯菜,就有可能發(fā)生食物中毒。
產(chǎn)氣莢膜梭菌的保藏方法:
1.傳代培養(yǎng)保藏法:又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細(xì)菌用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2.液體石蠟覆蓋保藏法:是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)入,以減弱代謝作用。
3.載體保藏法:是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4.寄主保藏法:用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5.冷凍保藏法:產(chǎn)氣莢膜梭菌可分別放在低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等進(jìn)行保存。